其他辅助检查:
1.电镜与免疫电镜检查 可直接观察病毒形态及特异性抗原颗粒的检出,用ELISA法检测轮状病毒虽已大大超过电镜检查,但电镜对其他致腹泻性病毒如腺病毒、冠状病毒等,仍属需要。对隐孢子虫的结构和生活循环可进行观察,电镜扫描对肠道微生物,能获得特殊形象,但手续过繁。
2.免疫学检查 包括ELISA、固相放射免疫法及反向被动血凝法。用于检测粪便中细菌、病毒抗原、血清中特异性抗体,特别以单克隆抗体为诊断试剂应用以来,大大提高了灵敏性与准确性,已用于大肠埃希杆菌LT肠毒素、轮状病毒、婴幼儿腹泻病毒的鉴定和阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫抗原、抗体等的检测。
3.气相色谱仪 已较普及地用于对厌氧菌的鉴定,如用于难辨梭状芽孢杆菌的快速诊断等。
4.聚合酶链反应(PCR) 特异扩增病原体目的基因,简便、快速、敏感,不需培养可直接用于粪便检测,是目前感染性腹泻,尤其是病毒性腹泻病原诊断的一种理想技术。
5.芯片技术 DNA芯片技术或基因芯片是指同时将极其大量的探针分子固定到固相(玻璃片或硅片)支持物上,借助核酸分子杂交配对的特性将DNA样品的序列信息作高通量、高效率的解读和分析的技术。
(1)DNA芯片技术的特点有:
①微量化(上样量最小达0.25~1nl)。
②规模大、信息储量大(已有短阵排列高于100万种的寡核苷酸探针)。
③并行化(如30万种微矩阵排列的探针同时与1万种待测DNA杂交,完成杂交)。
④高效率和高度自动化(由于信息容量大、矩阵排列、同时检测),操作、运行完全自动化,故效率极高。
(2)DNA芯片技术的应用十分广泛,前景广阔、进展迅速。主要应用于:
①DNA序列分析。
②基因突变、基因多态性分析与肿瘤的诊断。
③新药开发与组分筛选。
④基因差异表达与基因表达谱的分析。
⑤病原微生物和传染病的实验诊断。
6.T7核糖核酸聚合酶放大的免疫检测系统(IDAT) IDAT(immuno-detection amplified by T RNA polymerase),即T7核糖核酸聚合酶放大的免疫检测技术,该技术通过固定一种目标蛋白质(用信号显示其存在)与抗体结合后激发助催化剂,后者可再激发T7核糖核酸聚合酶活化、转录出特定核糖核酸分子(信号分子)作为指示系统。IDAT法的灵敏度极高(可检测单种蛋白质分子),操作简便(可自动化)。进一步改良使用通用的探测分子,则可能探测无限多种蛋白质及脂质、糖分和其他细胞分子。IDAT技术与蛋白质芯片技术结合将把生物芯片技术推向新水平。在癌症早期发现、筛选新药与分子样本等重要领域发挥潜在用途。
7.选择性捕获转录序列的分析系统(SCOTS) SCOTS技术由Graham和Clark-Curtiss等1999年建立,他们共同研究结核杆菌在人巨噬细胞内的反应时,发现与DNA修复、营养代谢、转录调节及毒力产生等有关的许多基因发生了转录。Morrow等联合应用SCOTS和基因组差异杂交方法,检测伤寒杆菌在对巨噬细胞基因组内的某些操纵子和转录调控因子作了研究。显然,利用SCOTS技术或与当代的新型实验手段相合,可从基因组水平认识基因表达,揭示细菌等病原体进入机体、相互作用及感染机制,将会极大地丰富研究内容,提高实验诊断水平。